重要提示
1. 与常规转染试剂不同,使用 QuickShuttle 可在贴壁细胞传代后尚未贴壁时直接进行转染(立传立转),从而可节省 18~24 小时的转染前细胞培养时间。
2. QuickShuttle 极大简化了转染操作,转染试剂和质粒混合后无需室温静置孵育,可直接加入含血0清的细胞培养基中进行转染,而且无需在转染后补加血0清或更换培养基,整个转染操作可在一分钟内完成。
3. 立传立转、一分钟完成转染操作和高转染效率等优点使得部分使用 QuickShuttle 的转染实验可在细胞传代后 24 小时内完成,从而比常规转染试剂节约 24~48 小时。
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将上述复合物直接加入到细胞培养基中,轻摇细胞板或用加样器吸打混匀。备注:转染复合物可直接加入含血0清的细胞培养基中进行转染。在极0少情况下会出现贴壁细胞脱落现象,可先从待转染细胞孔中吸取 500μl 培养基与转染复合物预混后再加入细胞中。若在细胞瓶中进行转染,直接加入到无细胞贴壁的对面或侧面并摇匀即可。
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DEAE-葡聚糖转染法
DEAE-葡聚糖转染法的原理时带正电的DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成复合物通过细胞内吞噬作用而使DNA转导进入细胞核。此法只适合瞬时转染实验,转染试剂,转染效率与DEAE-葡聚糖的浓度以及细胞与DNA/EDAE-葡聚糖混合液接触时间的长短有关,可采用较高浓度的DEAE-葡聚糖(1g/L)作用较短时间(0.5-1.5h),也可用较低浓度(250mg/L)的DEAE-葡聚糖坐拥较长时间(8h)。
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