腺病毒滴度检测 博特龙技术有限公司

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博奥龙公司主要产品有抗0体制备全套产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗，涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗；品类齐全的内参标签抗0体；另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。

单克0隆抗0体（单抗制备）制备过程有以下几个步骤：

步骤一：细胞免0疫

免0疫动物免0疫动物是用目的抗原免0疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的免0疫方案进行免0疫注0射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免0疫器0官，刺激相应B淋巴细胞克0隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

步骤二：细胞融合

采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾0脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨0髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙 二醇。在聚乙 二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨0髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

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取血：

免0疫一周后，可以耳动脉取血检测抗0体效价。因为起初几次免0疫产生的抗0体的效价比较低，头两次取血，够检测用即可。在三次免0疫后，可以获得较高0效价的抗0体，每次取血量可以在40ml，不要取太多，否则会造成兔子贫0血。

前几次取血用19号针头对兔子进行耳动脉取血，室温过夜析出血0清。

zui后一次取血可以采用颈动脉放血，具体操作如下：

1、家兔仰卧于兔架上固定头部，用纱布固定四肢。头部略放低以暴露颈部。剃毛并消毒皮肤。

2、沿颈部中线用手术刀切开皮肤约10cm，分离皮下结缔组织，直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌(小心操作，如碰到小血管出血，腺病毒滴度检测，可用止血钳止血)。

3、用直头止血钳分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织，暴露出颈总动脉后用弯头眼0科镊使之游离，剥离神经和结缔组织。

4、于动脉下套入两根黑丝线，分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住。

5、用小拇指垫在血管下，用尖头眼0科手术剪在两根丝线间的动脉璧上剪一小口(勿剪断)，插入塑料放血管。再将近心端的丝线结扎固定于放血管上，以防放血管滑脱。

6、松开止血钳，使血液流入容器中。一般一只家兔可放血100-120ml。

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注：

抗原注0射以前需要收集一些正常血0清，已备检测抗0体时作为阴性对照。待兔子在新环境中稳定，大概需要四天左右时间，可以进行耳动脉取血。取血量约5ml足矣。

免0疫用的抗原必须纯化，否则影响抗0体的质量。抗原经FCA或FIA充分乳化后才能注0射。将抗原液与佐剂等比例混合后，置于混合器上使之剧烈振荡使抗原充分乳化，乳化过程比较费时、费力，但若乳化不充分，会影响免0疫的效果，振荡后，1000rpm离心一分钟，如水相和油相不分层即可注0射。首0次免0疫用FCA，以后都用FIA。

免0疫方法可采用背部多点注0射法。即于家兔脊柱两旁选4-6点皮下0注0射，每点注0.1ml，间隔2周后再于上述部位选不同点注0射(不要选择临近位点，否则溃疡愈合不好)。每次免0疫的抗原量约100μg。免0疫次数在四五次即可，抗原用量大可以减少次数。