注：对于灵敏度要求不是极高的普通实验室的染胶实验，一般染色10-20分钟（可以将100ng含量以上的蛋白染出条带），低背景，无需脱色，直接观察或者拍照；
对于灵敏度要求极高的染胶实验，一般可采用染色1-2小时（可以将10ng含量蛋白染出条带），低背景，无需脱色，直接观察或者拍照；
一般染色2小时后，蛋白条带基本不会再加深，而背景会继续加深，所以一般建议染色不要超过2小时。
过度染色
1. 没有有效封闭内源性过氧化物酶。
2. 不完全脱蜡。
3. 过度组织粘附。
4. 一抗稀释度不当。
5. 蛋白质非特异性结合。
不染色
1. 忘记加一抗、生物素化二抗或亲合素-HRP。
2. 处理过程中抗原破坏。
3. 固定不当。
4. 用含叠氮钠洗涤液。
5. 操作过程中样品彻0底干燥。
6. 未按操作程序操作。
染色较弱
1. 加免0疫试剂前没有将洗涤液去掉。
2. 抗0体稀释不当。
3. 显色前底物放置时间过长。
4. 过氧0化氢的破坏作用。
产品介绍
生物素/亲合素-HRP 系统提供在冰冻切片、石蜡包埋组织和细胞涂片中细胞表面抗原和胞内抗原快速和精0确定位的方法。试剂盒包括正常山羊或兔血0清、生物素标记的二抗和亲合素标记的 HRP。此系统与兔、小鼠来源的一抗使用。非特异性染色用与二抗同种动物的血0清封闭。组织、细胞片与未标记的一抗反应后，加生物素标记的二抗，孵育后，洗去二抗，与亲合素辣根酶孵育，洗去后加底物。
试剂盒组成
1. 洗涤缓冲液（10×浓缩）：100ml×2
2. 血0清封闭液：含 10%灭活正常山羊，含防腐剂：50 ml
3. 生物素标记的二抗：含 2.0 μg/ml，0.01M PBS，蛋白标记，pH7.4，稳定剂和防腐剂，工作液。规
格：山羊抗兔 50ml；或山羊抗小鼠 50ml
4. 亲合素-HRP，含 2.0 μg/mL，0.01M PBS， pH7.4，稳定剂和防腐剂，工作液，规格：亲
合素-HRP 50ml
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