转染试剂是一种新型高1效的阳离子聚合物。它可以与核酸(包括质粒、siRNA、寡聚核苷酸)相互作用形成一种复合物将核酸转运到真核细胞内,适用于大部分真核细胞的细胞转染。
转染效率较高,ABclonal 选取多种常见细胞系(包括 HEK293T、HCT116、HeLa、A549、C6、HEK293F 等),分别使用 HighGene 转染试剂和市面常规转染试剂产品进行细胞转染
磷酸钙在良好的转染条件下,可以在293T等细胞的转染达到较高的转染效率。但磷酸钙转染有一个突出的问题,非常不稳定,尤其受PH值的影响非常大,在实验中使用的每种试剂都必须小心校准,保证质量,因为甚至偏离zui优条件十分之一个PH都可能导致磷酸钙转染的失败,经常即使zui熟练的转染实验者也不能保证每次磷酸钙转染的成功,他们可能经常为莫名其妙的转染失败而沮丧。同时,他们还经常发现,往往小体积的转染比如6孔板以下的转染效果比较理想,可一换到大皿,经常转染效率下降很快。磷酸钙的先天缺陷往往是实验梗阻的主要原因。
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使用方法
1. 将新鲜消化的 BHK-21 细胞接种到 24 孔细胞板中,每孔 1~2×105细胞,1ml 完全培养基。备注:可在生长旺盛的细胞传代后直接按下述步骤 2~5 进行转染,无需 18~24 小时的等候时间。
2. 将 2μg 质粒 DNA 和 3~5μl 转染试剂分别稀释到 50μl 生理盐水中。备注:质粒 DNA 和转染试剂的zui适用量需要根据不同培养基来优化,但理论上不超出 1~2μg 和 3~5μl 范围。
3. 合并上述两溶液并混匀。备注:无需其它转染试剂所需的 10~30 分钟的等候时间。
4. 将上述复合物直接加入到细胞培养基中,用加样器吸打混匀。备注:转染复合物可直接加入含血0清的细胞培养基中进行转染。
5. 将细胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中进行培养。备注:无需在转染后 4~6 小时补加血0清或更换培养基。
6. 24~72 小时后根据实验需要进行瞬时表达分析或稳定细胞系加压筛选。
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