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博奥龙公司主要产品有抗0体制备全套产品、病毒包装相关产品、2万多种科研用抗原抗0体、1200多种二抗,涵盖20多个物种和HRP、Biotin、FITC、AU、PE、Dylight、Alexa Fluor、Cy3、Cy5、 AMCA、TRITC、Texa Red等标记二抗;品类齐全的内参标签抗0体;另有WB、IHC、ELISA、细胞培养相关试剂及诸多特色产品和特色技术服务。
不同细胞表面具有不同Ig的Fc受体,分别用FcγR、FcεR、FcαR等来表示。当Ig与相应抗原结合后,由于构型的改变,其Fc段可与具有相应受体的细胞结合。抗0体与Fc受体结合可发挥不同的生物学作用:
1.介导I型反应变应原刺激机体产生的IgE可与嗜碱性粒细胞、肥大细胞表面IgE高亲力受体细胞脱颗粒,释放组胺,合成由细胞FcεRI结合。
2.调理吞噬作用 调理作用(opsonization)是指抗0体、补体C3b、C4B等调理素(opsonin)促进吞噬细菌等颗粒性抗原。
3.发挥抗0体依赖的细胞介导的细胞毒作用。
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水佐剂免0疫步骤
步骤一:用生理盐水将抗原稀释到2倍zui终浓度。备注:推荐使用的抗原用量为(1)免0疫原性较弱的亚单位蛋白每针次1~50μg(通常为10~20μg);(2)免0疫原性较强的灭活全病毒和病毒样颗粒每针次0.1~10μg(通常为1~2μg)。
步骤二:充分混匀佐剂,无菌条件下取出所需量与抗原按体积比1:1迅速混匀。备注:本佐剂产生沉淀属正常现象,与抗原混合操作越快越好。
步骤三:通过后腿小腿肌肉注0射免0疫小鼠,每只小鼠100μl。备注:本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象,抽入针管前应充分混匀,病毒包装试剂,抽入针管后应尽快注0射。
步骤四:第21天按同样方式加强免0疫一针。备注:每次佐剂和抗原现配现用。
步骤五、第35天采微量尾血进行ELISA测定,抗0体滴度应在1:10000~1:10000000 范围内, 随后即可摘眼球采全血或进行脾细胞融合。备注:若极偶尔情况下抗0体滴度达不到实验需求,可在第42天再按同样方式加强免0疫一针。
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选择性培养
选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中,未融合的骨0髓瘤细胞因缺乏次黄 piao呤-鸟piao呤-磷酸核糖转移酶,不能利用补救途径合成DNA而死0亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄 piao呤-鸟piao呤-磷酸核糖转移酶,但其本身不能在体外长期存活也逐渐死0亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄 piao呤鸟piao呤磷酸核糖转移酶,并具有骨0髓瘤细胞能无0限增殖的特性,因此能在HAT培养基中存活和增殖。
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